Negation bedeutet, dass der Inhalt einer gebärdeten Äußerung verneint wird. Konkret heißt dies, dass ein positiver (assertiver) Inhalt einer Äußerung durch ein Negationselement wie beispielsweise Kopfschütteln verneint wird. So kann etwa die neutrale Aussage „eine Person kommt“ mittels begleitendem Kopfschütteln verneint werden: „Ein Person kommt nicht“. Ein weiteres Beispiel zeigt, dass eine positive Aussage wie „eine Person gebärdet“ von Kopfnicken, während die negierte Aussage „eine Person gebärdet nicht“ von Kopfschütteln begleitet wird. So wird auch im folgenden Beispiel die bejahende Äußerung „der kleine Bub schreibt“ (begleitet von Kopfnicken) der verneinten Äußerung „das kleine Mädchen schreibt nicht“ (begleitet von Kopfschütteln) gegenübergestellt. Der Inhalt einer Aussage kann im Allgemeinen auf zwei unterschiedliche Arten verneint werden: Entweder wird die gesamte Äußerung bzw. ein Teil der Äußerung von Kopfschütteln begleitet oder das Kopfschütteln als Verneinungselement wird der Aussage nachgestellt. Im Beispiel „das Baby ist gehörlos“ wird zuerst die Aussage durch begleitendes Kopfschütteln verneint, während im Anschluss dieselbe Äußerung durch ein Kopfschütteln nach der Aussage negiert wird.
Negatives Kopfschütteln kann ebenso in anderen Sprachkontexten auftreten. Ein Beispiel dafür ist das Kontrastieren von positiv und negativ bewerteten Aussagen. So kann ein Satzteil mittels Kopfnicken als positiv bewertet werden, während ein darauf folgender mittels Kopfschütteln als negativ eingestuft wird. Hierbei dient das Kopfschütteln nicht dem Verneinen eines Inhaltes, sondern dem Ausdruck negativer Bewertung: „Früher war ich ein sehr engagierter Obmann, aber jetzt habe ich kein Interesse mehr an dieser Arbeit.“ Der erste Satzteil wird durch Kopfnicken als positiv bewertet. Der zweite Satzteil wird mit Hilfe des Kopfschüttelns als negativ empfunden. (Der unterstrichene Teil des Beispiels wird von Kopfschütteln begleitet.) Weitere Erläuterungen und Beispiele zur Anwendung finden sich in den folgenden Unterkapiteln.